WB實驗代測中的顯影原理

　　WB，也稱Western blot、Western blotting、Western印跡，是用抗體檢測蛋白的重要方法之一。Western可以參考如下步驟進(jìn)行操作。

　　與southern或northern雜交方法類似，但western免疫印跡采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

　　進(jìn)行WB實驗代測時設(shè)置的對照

　　成功進(jìn)行WB實驗代測，則設(shè)置合適正確的對照是*的，只要正確設(shè)置了這些對照，即可快速和準(zhǔn)確的找到WB的問題所在，并保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和特異性！一般需要設(shè)置的對照如下：陽性對照：明確表達(dá)檢測蛋白的組織或細(xì)胞，用于檢測抗體的工作效率；陰性對照：明確不表達(dá)檢測蛋白組織或細(xì)胞，用于檢測抗體的特異性；二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性；內(nèi)參對照：檢測標(biāo)本的質(zhì)量和二抗系統(tǒng)；空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質(zhì)和封閉的效果。